我们是这样做的，我觉得比较简单，但是较为考验操作技术，不过多挑几个培养皿，熟悉一下就能挑到很多的克隆。简单的来说，是这样的：首先转染后的细胞（或者其他细胞系）按照一定的比例稀释到100mm培养皿（比如1:50,1:100,具体根据那种细胞生长速度的快慢而定，保证之后长出的单克隆与单克隆之间有足够的间隙空间，方便挑克隆），加抗生素选择性培养，大概一周到两周（视细胞系而异）后能长出肉眼可见的细胞单克隆，不是很清晰，但在超净台中对着日光灯能看清楚的；这时准备挑克隆了，准备一块96孔板，加上100ul/well培养基；准备一盒灭菌后的200ul普通黄枪头（20ul的白枪头我试过不好用）；先吸掉培养皿里的培养基，用PBS润洗一遍细胞（要是熟练了挑克隆的速度比较快，我们也直接用胰酶润洗，另外对一些难消化的细胞，用胰酶润洗的效果比PBS好），再用100ul移液枪调到20-30ul量程，吸取大约10ul左右胰酶，在日光灯下对着细胞克隆吹打并吸取，加到96孔板中即可。) z d) u) E5 G, I

刚开始用这种方法，可能吸不上细胞，导致整个96-孔板可能基本上白板，没几个克隆被挑出，但多练习几次就可以了，基本上一吸一个准；不过，这种方法容易导致克隆不纯，这也是为什么之前克隆稀释的时候要按照一定的比例，保证克隆与克隆之间有足够的间隙；但是，还是不能保证克隆很纯，在鉴定出阳性克隆之后，如果觉得有必要，克隆到时候再做一个单克隆稀释。

/ p$ s0 x# a" t y) O我们用这种方法很久了，觉得比较有效，已经成功构建了很多的细胞系。

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